酶的失活时间取决于多种因素，包括酶的种类、环境条件（如pH值、温度）以及是否处于活性状态。以下是一些关键点：
pH值影响
酶有其最适宜的pH范围，超出这个范围酶会失活。例如，5'磷酸二酯酶的最适宜pH为5.0，pH超过7.0时活性会显著下降。
温度影响
大多数酶对热敏感，通常在35℃~40℃以上就会失活。低温保存（-5℃~-20℃）可以延长保存时间，而-70℃下保存则更为理想。
某些酶可以耐受高温，如核糖核酸酶可以短时煮沸，胰蛋白酶在稀HCl中可以耐受90℃，蔗糖酶在50℃~60℃可以保持较长时间不失活。
使用状态
在正常使用中，如Protease K可以持续工作5-6小时，直到被高温灭活。
taq聚合酶在PCR反应中大约能维持2~3小时活性，之后活性显著降低。
保存方式
制成干粉或结晶保存可以提高稳定性，例如葡萄糖氧化酶干粉在0℃下可保存2年。
体内代谢
溶解酶（透明质酸酶）打开后7天内需要用完，否则应丢弃，因为超过7天后酶会失效。
酶的可逆调节
酶的失活通常是逐步发生的，通过可逆的共价修饰（如磷酸化和去磷酸化）在活性形式和非活性形式之间转换。
特定酶的特性
某些酶在发挥作用后立即失活，如Tn5转座酶，在DNA切割后将自身携带的特定核酸序列转移到DNA末端后失去活性。
酶的反复利用
大部分酶在催化完一个底物分子后，会继续发挥作用，催化其他底物分子。
请根据具体情况选择合适的保存和使用方法，以确保酶的活性。